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                                                        產(chǎn)品品牌
: REAGEN  - 
                                                        產(chǎn)品貨號
: RNS92049  - 
                                                        產(chǎn)品規(guī)格
: 20T  - 
                                                        產(chǎn)品適用
: 禽流感病毒H5N1的檢測和判定  - 
                                                        產(chǎn)地來源
: 深圳  
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:禽流感病毒H5N1核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規(guī)格】
50人份/盒
【預期用途】
對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進行檢測,適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學調查。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應(PCR)結合Taqman技術,對禽流感病毒H5N1亞型的特異性核酸片段進行熒光PCR檢測。
【主要成分】
 組分成分  | 50人份/盒  | 主要成分  | |
規(guī)格  | 數(shù)量  | ||
 
 PCR反應液  | 
 
 884μL /管  | 
 1管  | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系  | 
 酶混合液  | 156μL /管  | 1管  | Taq酶、MMLV酶  | 
陽性對照  | 200μL /管  | 1管  | 含目的片段的質粒  | 
陰性對照  | 500μL /管  | 1管  | 無核酸酶水  | 
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存,有效期為12個月。本產(chǎn)品反復凍融應不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR儀.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。
【樣本要求】
1. 適用樣本
咽拭子:應使用專用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側扁桃體部位;迅速將拭子放入標本采集管中,旋緊管蓋并密封,以防干燥。
全血:疑似感染動物的靜脈血2mL至EDTA-2Na抗凝管,8000rpm離心2min,取適量上清液于1.5mL滅菌離心管中。
2. 樣本運輸和保存
上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
取待測樣本200ul,按照核酸提取試劑盒說明書進行核酸提取。
2. 試劑配置(在準備區(qū)進行,與擴增區(qū)分開,冰上操作)
注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。
若有N個待檢測樣本,則需配置N+2擴增反應(待檢樣本數(shù)N+1個陽性質控品+1個陰性質控品),按下表要求進行擴增反應液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標記,擴增反應液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
N人份(μL)  | |
PCR反應液  | (N+2)×17  | 
酶混合液  | (N+2)×3  | 
總量  | (N+2)×20  | 
3. 加樣(在樣品處理區(qū)進行,冰上操作)
按陰性質控品、待測樣品、陽性質控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴增反應液的八聯(lián)管中,反應總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應(在擴增區(qū)進行)
選擇FAM通道檢測H5亞型,選擇HEX通道檢測N1亞型。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數(shù)。
步驟  | 溫度  | 時間  | 循環(huán)數(shù)  | |
1  | 逆轉錄  | 50℃  | 10min  | 1  | 
2  | 預變性  | 95℃  | 3min  | 1  | 
3  | 變性  | 95℃  | 10sec  | 45cycle  | 
4  | 退火延伸及熒光檢測  | 55℃  | 30 sec  | |
報告熒光:FAM、HEX;淬滅熒光:NONE。  | ||||